[平江特产] - 什么是噬菌体效价,简述双层平板法的原理与主要操作

一、什么是噬菌体效价,简述双层平板法的原理与主要操作

噬菌体的分离纯化及效价的测定

1

目的

1.1

了解噬菌体效价的含义及其测定原理。

1.2

学会检查噬菌体的方法。

1.3

掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。

2

原理

噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，

其个体形态极其微小，

用常规

微生物计数法无法测得其数量。

当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，

释放出

大量子代噬菌体，

然后它们再扩散和侵染周围细胞，

最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变

清，

或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬菌斑。

了解噬菌体的特性，

快速

检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。

检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌

水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）

。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体

数量增加。

采用生物测定法进行噬菌体检查，

约需

12h

左右，

因而不能及时判断是否有噬菌体污染。

通过

快速检查可大致确定是否有噬菌体污染

，

以采取必要的防治措施。

根据

正常发酵

（培养）

液离心后菌体沉淀，

上清液蛋白含量很少，

加热后仍然清亮；

而侵染有噬菌体的发酵

（培养）

液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，

加热后发生蛋白质变性，

因而在

光线照射下出现丁达尔效应而不清亮

。

此法简单、

快速，

对发酵液污染噬菌体的判断亦较准

确。

但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，

对

侵染噬菌体较少的一级种子培养液

也往往

不适用。

噬菌体的效价即1

mL

样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼

脂平板法。

由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，

一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，

故可

根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，

计算出噬菌体的效价。

此法所形成的噬菌

斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。

二、筛前神经阻断术的技术步骤

病史检查诊断：根据患者过去病史及家族史的情况寻找病因进行诊断；

鼻镜下检查：通过鼻内窥镜将病灶放大500倍进行检查，确定病变组织范围及病情；

鼻腔分泌物涂片检查：采集鼻分泌物进行显微镜下培育进行化验检查，以确定病情轻重；

变应性激发试验：一般用皮肤试验(划痕、皮内及接触法等)，原理是有多种假定的变应物质，使与机体接触后，视有无反应出现，可协助诊断 阻断筛前神经、翼管神经和下鼻甲神经，以降低鼻腔副交感神经的兴奋性、改善鼻腔通气功能，从而达到治愈的疗法效果目的。

三、出国能学习些什么技术呢？

出国留学之前，一般都需要做足大量充分的出国留学准备，才能做到万无一失，而作为留学出发前的提醒，建议学生在出国之前，要充分了解身边一切可以利用的资源，以及时解决学习、生活、心理、健康、法规以及安全等方面的问题。例如：不管是欧美还是日本；牙齿和眼睛(法国除外)都不在医疗保险范围之列，在国外，这两科的治疗费又很昂贵；因此，建议学生在出国前事先做好牙科治疗，多配几副眼镜 可以去学习下ipa的对外汉语教学技术 以后还能多个和老外交流的途径

四、生物中接种方法→平板划线法要注意什么

（1）要注意全程无菌操作；

（2）滑动时用力要均匀，切勿将接种环嵌入培养基内；

（3）平板应较硬、较厚、表面干燥；

（4）需要分区的时候，划完一个区后必须烧去接种环上的残菌，待冷却后再划另一个区；

（5）划线的线条宜平行、密集、整齐。

接种是食用菌生产中的关键环节之一，如果接种技术不过关，即会造成杂菌污染，成活率低而前功尽弃。无论是菌种分离、传代还是扩繁，都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。

扩展资料

  常用的接种方法

1、三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法是把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

2、穿刺接种

在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针，用的培养基一般是半固体培养基。用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

3、浇混接种

将待接的微生物和45℃左右的固体培养基进行混合，这样菌液就达到稀释的目的，待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

4、涂布接种

将菌液倒入凝固的平板上面，用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落

5、注射接种

用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

6、活体接种 

活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

参考资料来源：百度百科--划线平板

参考资料来源：百度百科--接种